Главная » 2018 » Февраль » 13 » Диагностика TORCH-инфекций
11:47
Диагностика TORCH-инфекций

В 1971 г. ВОЗ объединила наиболее опасные врожденные инфекции в TORCH-комплекс — группу внутриутробных инфекций, вызывающих стойкие структурные изменения плода. Как правило, в группу TORCH-инфекций включают следующие заболевания: T — токсоплазмоз (toxoplasmosis), О — другие инфекции (others), R — краснуху (rubella), С — цитомегаловирусную инфекцию (cytomegalovirus), H — герпес (herpes simplex virus). В «другие инфекции» включают влияющие на плод инфекции — хламидиоз и гепатиты В и С. Недавно в этот перечень включена и ВИЧ-инфекция.

Опасность первичного заражения TORCH-инфекциями в период беременности состоит в том, что, протекая бессимптомно, они могут оказывать пагубное действие на все системы и органы плода, особенно на его центральную нервную систему, повышают риск выкидыша, мер-творождения и врожденных уродств ребенка, формирования пороков его развития, вплоть до инвалидности.

Новая медицинская технология — «Быстрые простые методы в диагностике заболеваний TORCH-комплекса» — зарегистрирована Минздравсоцразвития (регистрационное удостоверение № ФС-2006/002). Этот документ регламентирует деятельность лаборатории в соответствии со стандартами и требованиями Минздравсоцразвития при использовании данной технологии в практике исследований пациентов на TORCH-инфекции. Технология экспресс-диагностики TORCH-инфекций основана на применении унифицированной схемы анализа сыворотки, плазмы или цельной крови пациента для обнаружения маркеров широкого спектра врожденных инфекций.

Для ускорения лабораторных исследований и снижения расходов на оборудование были выбраны высокотехнологичные бесприборные иммуноферментные тесты ИммуноКомб (производств фирмы Orgenics, входящей в корпорацию Alere Inc, США). Тесты ИммуноКомб сочетают достоинства классического ИФА — высокую специфичность и чувствительность с простой и быстрой процедурой постановки анализа. Методика не требует дополнительного оборудования, ИммуноКомб содержит все необходимые для проведения анализа реагенты. В состав набора ИммуноКомб входят 3 пластиковых гребня с нанесенными антигенами или антителами, являющимися твердой фазой, 3 проявочные ванны, заполненные всеми необходимыми реагентами, положительный и отрицательный контроли. В состав наборов для визуального количественного определения титра антител входит цветная шкала КомбСкейл.

При проведении анализа сыворотку, плазму или цельную кровь человека (10—50 мкл, в зависимости от выявляемой инфекции) вносят в ячейки ряда А проявочной ванны и приводят ее в контакт с твердой фазой — гребнем. Затем гребень переносят из ряда в ряд проявочной ванны и через 40 мин получают результат в виде окрашенных точек. Результат учитывается визуально или автоматизированно на приборе КомбСкан. При визуальном учете уровень видоспецифических антител оценивается с помощью калибровочной шкалы КомбСкейл. В тесте предусмотрен внутренний контроль (верхняя точка), подтверждающий достоверность проведенного анализа и сохранность реагентов во время транспортировки и хранения. Все наборы ИммуноКомб рассчитаны на 36 определений. Для индивидуального тестирования гребень можно согнуть и отломить необходимое количество зубцов. При этом в проявочной ванне вскрывается только необходимое количество ячеек (соответствующее числу зубцов). Невскрытые ячейки и неиспользованные зубцы хранятся в течение срока годности тест-системы.

Технология ИммуноКомб разработана Парижским институтом Пастера (Франция), запатентована фирмой Орженикс и не имеет аналогов в мире. В технологии ИммуноКомб учтены особенности появления первых антител, которые отличаются от антител, полученных позднее, во время задержанного иммунного ответа (различные изотипы синтезированных антител, различная аффинность и авидность, направленность на различные эпитопы антигенов). Разработаны и подобраны модификации ИФА, обеспечивающие достоверное выявление конкретной инфекции: непрямой метод твердофазного ИФА использован для выявления IgG и IgA антител к Chlamydia trachomatis и Chlamidia pneumoniae, IgG и IgM — к токсоплазме, цитомегаловирусу, вирусам краснухи, гепатита С, IgG антител — к ядерному антигену вируса гепатита В, антител к ВИЧ 1 и 2 типа; «сандвич»-вариант применен для определения поверхностного антигена вируса гепатита В; метод двойного распознавания выбран для выявления IgM антител к ядерному антигену вируса гепатита В; метод иммунного захвата оптимален для обнаружения IgG и IgM к вирусу гепатита А. На твердую фазу — гребень — иммобилизованы инактивированные антигены или антитела, подвергнутые дополнительным патентованным методам очистки. Это позволяет избежать перекрестных реакций, отследить появление первых антител и выявить раннюю стадию заболевания. Для обеспечения высокой чувствительности тестов ИммуноКомб применяется реакция связывания с использованием фосфатазно-щелочного конъюгата. Французское агентство по контролю за медикаментами (ADA), оценивая тесты, разрешенные для использования в клиниках Европы, подчеркивает, что использование фосфатазно-щелочного конъюгата позволяет достичь наиболее высокой чувствительности по сравнению с тестами, основанными на пероксидазной реакции. Большинство иммуноферментных планшетных тест-систем российских производителей основаны на пероксидазной реакции. Тесты ИммуноКомб воспроизводят полноценный иммуноферментный анализ без использования оборудования. Чувствительность и специфичность их соответствуют показателям планшетного ИФА (ELISA) признанных международных производителей, в то время как чувствительность и специфичность иммунохроматографических экспресс-тестов значительно ниже планшетного ИФА (ELISA), что было подтверждено испытаниями ВОЗ и Государственными сравнительными испытаниями в Российской Федерации.

Алгоритм диагностики TORCH-инфекций основан на обнаружении специфических антител классов М, А и G к возбудителю инфекции. Часто сам возбудитель из-за сложности взятия его для анализа не может быть определен. Например, при хронической форме возбудитель хламидийной инфекции или его антигенные и нуклеиновые компоненты могут не выявляться в нижних половых путях. Chlamydia trachomatis поглощается периферическими моноцитами, распространяется и оседает в различных органах и тканях организма человека, сохраняясь там в течение длительного времени, что обычно приводит к развитию восходящей персистирующей формы инфекции, которая обусловливает хроническое течение болезни. При этом время от времени происходит высвобождение антигенов Chlamydia trachomatis из клеток, которое приводит к индуцированию гуморального ответа и накоплению специфических сывороточных антител, выявляющихся серологическими исследованиями. Обычно имеет место высокая корреляция между уровнем IgA антител к Chlamydia trachomatis и фактическим наличием хламидийного антигена. Поэтому для выявления TORCH-инфекции выбран серологический метод, который позволяет осуществлять диагностику даже в тех случаях, когда физический доступ к очагу инфекции затруднен.

При скрининге на TORCH-инфекции с помощью тестов Иммуно-Комб возможно проведение анализа образцов на наличие антител класса IgM, IgA, IgG к соответствующему возбудителю, в том числе количественных анализов на наличие антител класса IgG. Для уточнения стадии заболевания анализируются парные сыворотки. Наличие низких уровней IgG к возбудителю в сыворотке человека должно рассматриваться как ранее перенесенная инфекция или проведенная терапия антибиотиками (антитела в крови могут сохраняться до 3—6 мес. после излечивания). Существенное нарастание титра антител класса G в парных сыворотках (в 4—8 раз от первоначального уровня) свидетельствует об активной фазе инфекции. В этом случае следует провести параллельное исследование на наличие антител класса M или класса А. Высокий уровень антител класса M или А подтверждает активное течение инфекции или рецидив заболевания.

Данная технология может использоваться во всех без исключения лечебно-профилактических учреждениях стационарного и амбулаторно-поликлинического типа, включая первичное звено здравоохранения, выездные кабинеты.

Категория: Герпесвирусные инфекции человека | Просмотров: 6 | Добавил: Serxio1103 | Рейтинг: 0.0/0
Всего комментариев: 0
avatar