10:42 Идентификация и установление структуры полисахаридов | |
Идентификацию полисахаридов в ЛРС можно проводить микрохимическими, гистохимическими и качественными реакциями. Разнообразие полисахаридов, их способность образовывать гомологические ряды гликанов с разной молекулярной массой не позволяют использовать для их идентификации единую реакцию. Реакции обнаружения полисахаридов можно разделить на 2 группы: реакции на полисахариды; реакции на продукты их гидролиза (моносахариды, уроновые кислоты). Из водных извлечений сырья при добавлении этанола 96% происходит высаждение полисахаридов с образованием хлопьевидных сгустков, выпадающих в осадок при отстаивании. Классическим реактивом для обнаружения крахмала является раствор йода (появление синего окрашивания). Реактивом Молиша (а-нафтол и кислота серная концентрированная) идентифицируют инулин. При нанесении реактива на излом корня некоторых растений семейства Астровых — Asteraceae образуется фиолетовое окрашивание. В продуктах гидролиза идентифицируют восстанавливающие или невосстанавливающие моносахариды. Наиболее распространенными качественными реакциями на восстанавливающие сахара являются: реакция с реактивом Фелинга (образование кирпично-красного осадка меди(I) оксида) и реактивом Толленса (образование «серебряного зеркала»). Кислые моносахариды можно определить с раствором карбазола (образование малинового окрашивания). Наличие слизи можно доказать несколькими реакциями — с натрия гидроксидом (образование лимонно-желтого окрашивания); с меди сульфатом в растворе щелочи (у растений семейств Мальвовые, Орхидные слизь окрашивается в синий цвет, у растений семейства Лилейные — в зеленый); с бензидином (в желтый). При проведении гистохимической реакции «двойного окрашивания» с раствором железа хлорида и раствором метиленового синего клетки со слизью окрашиваются в желтый, механические волокна — в голубой, сосуды древесины — в зеленый цвет; со спиртовым раствором метиленового синего клетки со слизью окрашиваются в голубой цвет; с тушью клетки со слизью видны белыми пятнами на черном или сером фоне, поскольку тушь не окрашивает слизь. Клетчатку (целлюлозу) можно обнаружить с помощью микрохимической реакции с хлор-цинк-йодом (сине-фиолетовое или сиреневое окрашивание оболочек клеток); со спиртовым раствором йода целлюлоза окрашивается в желтый или коричневый цвет — в этом ее отличие от крахмала. Кислоту альгиновую обнаруживают реакцией с пиридином и меди(П) сульфатом в присутствии кислоты серной (при наличии альгинатов выпадает осадок). Хроматографический анализ. Для анализа ЛРС, субстанций и фитопрепаратов используют бумажную (БХ), тонкослойную (TCX) и высокоэффективную жидкостную хроматографию (ВЭЖХ). При кислотном гидролизе полисахариды образуют моно- и олигосахариды. Методами БХ, ТСХ, ВЭЖХ устанавливают углеводный состав гидролизата, который свидетельствует о строении отдельных фрагментов молекулы полисахарида. Для установления структуры полисахарида определяют молекулярную массу, моносахаридный состав, изучают характер связей между остатками моносахаридов, очередность их расположения в цепи и вид ветвления молекулы. Важным методом исследования является их частичный кислотный или ферментативный гидролиз до и после метилирования. Анализ продуктов метилирования проводят бумажной, тонкослойной и газожидкостной хроматографией, электрофорезом, а также хромато-масс-спектрофотометрией. К современным методам анализа полисахаридов относятся гель-фильтрация, ионообменная хроматография, метод перйодатного окисления, ИК-, ЯМР-спектроскопия, аффинная хроматография на лектинах, ультрацентрифугирование, иммунохимические методы и др. Вид хроматографии — гель-фильтрация на сефадексе позволяет разделить вещества в зависимости от их молекулярного веса. Ионообменная хроматография позволяет разделить вещества в соответствии с их зарядом, например, отделить кислые полисахариды от нейтральных. | |
|
Всего комментариев: 0 | |