Для серологической диагностики псевдотуберкулеза в разное время использовали различные методы. Некоторые из них сейчас представляют только исторический интерес (реакция преципитации, реакция связывания комплемента — PCK, реакция бактериального лизиса). Реакция преципитации совершенно не выявляет антител в сыворотке больных людей. Преципитирующие сыворотки, необходимые для изучения антигенной структуры псевдотуберкулезного микроба или различных его антигенных комплексов, можно получить только при интенсивной иммунизации животных, причем наилучшие результаты наблюдались нами при иммунизации баранов.

В настоящее время в арсенале ученых есть хорошие методы и препараты для серологической диагностики псевдотуберкулеза (иммуноферментный, радиоиммунный и иммунофлюоресцентный методы, реакция коагглютинации, реакция торможения непрямой гемагглютинации и др.), однако тяжелое финансовое положение медицинской науки не позволяет довести эффективные диагностические препараты до стадии внедрения в практику. Фактически сейчас для серологической диагностики псевдотуберкулеза наши практические лаборатории используют реакцию непрямой гемагглютинации (РНГА) с эритроцитарным коммерческим диагностикумом производства НИИВС (Санкт-Петербург) и реакцию агглютинации (чаще всего с живыми культурами возбудителя псевдотуберкулеза).

Реакция агглютинации (PA). В качестве антигена в этой реакции используют типовые штаммы бактерий псевдотуберкулеза или приготовленные из них формалинизированные препараты. Применение PA в практике, к сожалению, ограничено из-за отсутствия коммерческих диагностикумов и необходимости постоянного контроля морфологических и культуральных свойств иерсиний перед исследованием сывороток крови больных для исключения диссоциированных культур.

Агглютинины в крови больных псевдотуберкулезом появляются в конце 1-й — начале 2-й недели; титры их колеблются в пределах от 1 : 100 до 1 : 12 800. Максимальные титры антител определяются на 3-й неделе болезни. Поданным Т.А. Шараповой и А.М. Королюка, агглютинины сохраняются в сыворотках крови реконвалесцентов до 1,5—2 мес в титрах от 1 : 50 до 1 : 400. По нашим данным, через год у 70 % лиц, переболевших псевдотуберкулезом, агглютинины выявлялись в титрах от 1 : 10 до 1 : 320. Большинство авторов считают диагностическими титры агглютининов в пределах 1 : 160 — 1 : 320. В крови 3—5 % здоровых людей, не болевших псевдотуберкулезом, агглютинины выявлялись в титрах 1 : 40 — 1 : 80, что объясняется, с одной стороны, естественной иммунизацией бактериями псевдотуберкулеза вследствие их чрезвычайно широкого распространения во внешней среде, с другой — наличием общих антигенов у псевдотуберкулезного микроба с некоторыми представителями семейства Enterobacteriaceae (сальмонеллами) и Y. pestis.

В PA в качестве антигена, как уже отмечалось, можно использовать живые культуры псевдотуберкулезного микроба. Поскольку эта реакция является типоспецифической, необходимо применять все серологические варианты псевдотуберкулезного микроба. Чрезвычайно большая склонность возбудителя псевдотуберкулеза к диссоциации, при которой изменяются его антигенные свойства, не всегда позволяет использовать живые культуры в практических лабораториях. Для усовершенствования серологической диагностики псевдотуберкулеза Н.Ф. Тимченко предложила формалинизированный корпускулярный псевдотуберкулезный диагностикум.

На большом материале установлено, что проведение PA подтверждает диагноз псевдотуберкулеза в 75—95 % случаев. Отрицательные результаты у отдельных больных с типичной клинической картиной псевдотуберкулеза объясняются, с одной стороны, тем, что очень сходная картина может быть при инфекции, вызванной родственным микроорганизмом — Y. enterocolitica, с другой стороны, это, по-видимому, зависит от индивидуальных особенностей организма больного. Нам приходилось неоднократно наблюдать типичные случаи псевдотуберкулеза, когда диагноз подтверждался путем бактериологического высева культуры, а PA оставалась отрицательной.

Необходимо отметить, что агглютинат при положительной PA бывает мелкозернистым, поэтому реакцию лучше читать с помощью лупы в проходящем или частично отраженном свете. PA при псевдотуберкулезе ставят так же, как и реакцию Видаля при брюшном тифе. Парные порции сыворотки крови от больного лучше всего брать в конце 1-й и в середине 2-й недели болезни.

О.А. Бургасова и соавт. отмечают преимущественное диагностическое значение PA при исследовании сыворотки крови больных с различной степенью тяжести течения псевдотуберкулеза.

Реакция непрямой гемагглютинации. РНГА была впервые применена при псевдотуберкулезе А.М. Королюком и оказалась высокоспецифичной. При проведении контрольных исследований с использованием сывороток против различных микроорганизмов (брюшнотифозной, сальмонелле зной, дизентерийной, бруцеллезной, туляремийной, чумной) положительные результаты были получены только при использовании противочумной сыворотки вследствие известной антигенной общности обоих микроорганизмов. За диагностический титр РНГА автор предложил принять разведение 1 : 100.

При псевдотуберкулезе серологические сдвиги установлены с помощью РНГА у 81,7 %, а с помощью PA — у 87,4 % больных. На основании исследований А,М.Королюк сделал вывод, что эффективность обеих реакций почти одинакова. Однако при их оценке выявляются и некоторые существенные различия, заключающиеся в том, что с помощью PA четырехкратные нарастания титров антител выявляются у 66, а при постановке РНГА — только у 47,1 % больных. Индекс прироста антител к 3-й неделе болезни при постановке РНГА был равен 5,1, при PA — 7,4. РНГА имеет преимущество перед PA в чувствительности: первая позволяет в более ранние сроки выявлять антитела и уступает второй в определении динамики серологических сдвигов, что дает основание считать РНГА менее ценной для диагностики болезни. В дальнейшем были сделаны небезуспешные попытки повысить чувствительность и специфичность РНГА путем применения для сенсибилизации эритроцитов различных антигенных комплексов, полученных химическим и механическим способом из псевдотуберкулезного микроба другими учеными. В частности, М.Ф. Дзадзиевой были испытаны экстрацеллюлярный антиген, липополисахарид, капсульный антиген, мочевинный экстракт соматического антигена, водонерастворимый бактериальный остаток, антиген типа Буавена и комплекс, полученный при нагревании концентрированной взвеси бактерий при 100 °С в течение 2 ч.

Наиболее чувствительным и специфичным оказался протеи-нолипополисахарид (ПЛПС), на основе которого был получен эффективный препарат для диагностики псевдотуберкулеза. Несколько ранее был испытан диагностикум на основе ЛПС-антигена, полученного методом Вестфаля. К сожалению, несмотря на прекрасные диагностические возможности, оба препарата по разным объективным причинам не были внедрены в практику.

В настоящее время выпускается коммерческий препарат — сухой антигенный эритроцитарный диагностикум (Санкт-Петербург, НИИВС), выявляющий в основном антитела к сероварианту 1 — Y. pseudotuberculosis.

В последнее десятилетие вновь возрос интерес к совершенствованию ингредиентов для РНГА. Н.Ф. Тимченко и соавт., Е.П. Недашковская и соавт. и А.Л. Беседнов в качестве сенситина для эритроцитов предложили термостабильный токсин (TCT) псевдотуберкулезного микроба. Показано, что TCT содержится в большинстве штаммов псевдотуберкулезного микроба и является видоспецифическим белком. Положительным качеством TCT служит то, что в процессе сенсибилизации эритроцитов этим антигеном не требуется дополнительных манипуляций с ним (обработка щелочью или другими веществами) или с эритроцитами (таннизация, обработка глутаровым альдегидом и др.). Полученный на основе TCT диагностикум обладает высокой специфичностью. Этим же автором впервые получена видоспецифическая иммунная сыворотка к 0,1 M фракции ТСТ, использование которой в работе позволяет экономить сыворотку к высокоочищенному ТСТ, процесс получения которого весьма длителен и трудоемок. Применение в научных исследованиях и практической работе сывороток к 0,1 M фракции TCT и высоко-очищенному ТСТ, а также диагностикума на его основе дает возможность охватить весь спектр иммунологических реакций — от самых сложных (РИА, ИФА и др.) до простых и широко используемых в практических лабораториях (PA, РНГА, PTHГА). К сожалению, и эта тест-система из-за недостаточного финансирования до настоящего времени в практику не внедрена.

Реакция торможения непрямой гемагглютинации. Эта реакция является достаточно эффективной для определения в различных биологических объектах антигенов бактериальной природы. В ее основе лежит выявление антигена при помощи индикаторной системы, состоящей из сенсибилизированных эритроцитов и гомологичной по отношению к примененному для сенсибилизации эритроцитов антигену и сыворотки. При специфическом соответствии искомого антигена и примененной сыворотки происходит нейтрализация данных ингредиентов; прибавленные к ним сенсибилизированные тем же антигеном эритроциты не агглютинируются. Эта реакция чувствительна и универсальна. Поскольку бактериологический метод позволяет получить положительный результат только на 5—30-й день от начала исследования, представлялось перспективным изучить возможность применения РТНГА для диагностики болезни. Для этого А.М. Королюк провел сравнительное исследование крови, фекалий и мочи больных псевдотуберкулезом при помощи бактериологического метода и РТНГА. При исследовании крови 44 больных псевдотуберкулезом оба метода дали отрицательные результаты. При исследовании испражнений 85 больных при помощи бактериологического метода было выделено 35 культур (51,1 %), при использовании РТНГА специфический антиген был выявлен у 36 больных (41,2 %). Совпадение положительных результатов при исследовании обоими методами наблюдалось у 36 % больных. В моче антиген псевдотуберкулезного микроба был обнаружен у 31 % больных, тогда как бактериологический метод дал отрицательные результаты. По-видимому, это объясняется тем, что в моче больных чаще находится растворенный антиген псевдотуберкулезного микроба, в то время как сам возбудитель присутствует в ней редко.

Учитывая эпидемиологические данные о том, что источником заражения людей при вспышках псевдотуберкулеза являются пищевые продукты, зараженные псевдотуберкулезным микробом, было важно разработать метод, который позволял бы быстро определять их зараженность и изымать такие продукты из употребления. Еще большее значение имеет применение этого метода для профилактики вспышек псевдотуберкулеза. Поскольку было неизвестно, можно ли определять при помощи РТНГА наличие псевдотуберкулезного микроба в овощах, корнеплодах и молочных продуктах и не помешают ли течению реакции их химический состав и физико-химические свойства, В.В. Колесникова и Г.П. Сомов провели экспериментальные исследования в этом направлении. Было показано, что с помощью РТНГА можно определять антиген псевдотуберкулезного микроба в искусственно зараженных им пищевых продуктах, что еще раз подтвердило универсальность этого метода, позволяющего находить бактериальные антигены в самых разнообразных биологических объектах.

Сравнительное исследование обсемененных бактериями псевдотуберкулеза пищевых продуктов, проведенное при помощи бактериологического метода и РТНГА, показало значительный процент совпадения положительных результатов. РТНГА давала отрицательный результат в тех случаях, когда в исследуемом материале было небольшое количество микробов (менее 30 000 — 40 000 микробных клеток в 1 мл). Большим преимуществом РТНГА перед бактериологическим методом является ее способность быстро выявлять в течение длительного периода бактериальный антиген, т.е. этот метод имеет значение и для ретроспективной диагностики, что может оказаться полезным при расследовании эпидемических вспышек, когда этиологическая природа заболеваний своевременно не была установлена.

Г.Я. Ценева и соавт. для подтверждения диагноза у больных с подозрением на псевдотуберкулез применили РНГА и РТНГА с иммуноглобулиновым диагностикумом к возбудителю псевдотуберкулеза сероварианта 1. Применение этого препарата в ходе эпидемиологической расшифровки вспышек обеспечивало раннюю (в первые 3 дня) постановку диагноза более чем у 50 % заболевших. Бактериологический анализ позволял подтвердить диагноз псевдотуберкулеза в этот период болезни лишь в 6,7 % случаев. С помощью РНГА с иммуноглобулиновым диагностикумом антиген возбудителя псевдотуберкулеза был определен в сыворотке крови в первые дни болезни у 15 из 318 больных. Этот факт имеет принципиальное значение, так как выделение возбудителя псевдотуберкулеза из крови с помощью бактериологического метода — достаточно редкое явление.

Рост заболеваемости детей псевдотуберкулезом послужил основанием для разработки модификаций серологических методов лабораторной диагностики с использованием микрообъемов материала. В.Н.Багрянцев и соавт. разработали капельный и дозаторный микрометоды РНГА и РТНГА, доступные всем практическим лабораториям. Использованные авторами объемные соотношения ингредиентов и оптимальные микроколичества веществ в реакциях позволили создать наиболее благоприятные условия для образования комплекса антиген — антитело.

Реакция коагглютинацт (РКА). Эта реакция применяется для экспресс-диагностики псевдотуберкулеза. В. Цанев изучил специфичность коагглютинационного теста с 68 штаммами бактерий родов Yersinia, Salmonella, Shigella, Esherichia, Proteus, Pseudomonas. Автор считает, что тест можно использовать для быстрого обнаружения и идентификации возбудителей иерсиниозов. Для диагностики псевдотуберкулеза этот тест использовался и другими авторами, отмечавшими высокую чувствительность, специфичность, простоту постановки реакции, доступность ее для малоос-нащенных лабораторий.

В 1997 г. Е.М. Климанова и К.Е. Лаврова для обнаружения и идентификации возбудителя псевдотуберкулеза использовали бактериологический метод, РНГА с поливалентным эритроцитарным диагностикумом и РКА. При сопоставлении данных бактериологического исследования и PKA отмечалось совпадение положительных результатов, однако они были получены при бактериологическом исследовании на 2—3-й неделе болезни, а при PKA — на 3—5-й день. РНГА дала приблизительно такие же результаты, что и PKA (соответственно 78,7 и 80,3 %), Авторы рассматривают PKA как более эффективный метод ранней диагностики псевдотуберкулеза по сравнению с традиционными лабораторными тестами, позволяющий подтвердить диагноз уже на 1-й неделе болезни, а также как возможный прогностический критерий волнообразного течения при длительном выделении антигена из биосубстратов в динамике болезни. Однако до настоящего времени диагностикум для этого теста не выпускается в промышленном масштабе и PKA используется только отдельными научными коллективами.

Иммунофлюоресцентный метод. Метод флюоресцирующих антител (МФА) для диагностики псевдотуберкулеза был впервые применен В.А. Знаменским и нами. Изучение возможности использования этого метода для диагностики болезни и индикации псевдотуберкулезного микроба во внешней среде провели Н.Ф. Тимченко и Л.П. Рожкова. Гипериммунные сыворотки получали путем многократной иммунизации кроликов убитой культурой псевдотуберкулезного микроба серовариантов 1—5 с 5-дневными интервалами. Для приготовления флюоресцирующих конъюгатов отбирали сыворотки с титрами 1 : 20 480 и выше. Соединение сыворотки с флюоресцеинизотиоцианатом проводили по методу Маршалла. При проверке специфичности полученных конъюгатов использовали S.typhi, S.enteritidis, S.anatum, Sh.flexneri, Sh.sonnae, E.coli 0124. Штаммы псевдотуберкулезного микроба с флюоресцирующей сывороткой соответствующего сероварианта давали яркое специфическое свечение (+4), тогда как с сыворотками против других серовариантов светились очень слабо (+). Приготовленные сыворотки также очень слабо (+,++) «окрашивали» сальмонеллы из групп Д и E и совершенно не «окрашивали» шигеллы и эшерихии.

При экспериментальном заражении различных объектов было установлено, что МФА позволяет выявить не менее 20000—40000 микробных клеток в 1 мл. При помощи полученных флюоресцирующих сывороток исследовали 410 проб фекалий от 246 больных псевдотуберкулезом, 76 проб фекалий от лиц, соприкасавшихся с больными, 139 проб из внешней среды и 25 — из органов грызунов, отловленных в очагах инфекции. Одновременно проводили бактериологическое исследование этого же материала. Совпадение положительных результатов, полученных при использовании бактериологического и иммунофлюоресцентного методов, составило 69,7 %. Расхождение результатов исследования при сравнительном испытании обоих методов — 31,1 % отрицательных результатов при использовании МФА при выделении культуры псевдотуберкулезного микроба и 39,8 % отрицательных результатов бактериологического исследования при положительной иммунофлюоресценции — имеет свое объяснение. Положительный результат при использовании МФА и отрицательном бактериологическом исследовании зависит от того, что первый метод выявляет как живые, так и погибшие микроорганизмы. Отрицательный результат МФА при положительном бактериологическом исследовании обусловлен тем, что в фекалиях больных людей имеется небольшое количество псевдотуберкулезных бактерий и они могут не попасть в ту порцию, из которой приготовлен препарат. При исследовании смывов с различных объектов овощехранилищ и капустных кочанов в одном из очагов псевдотуберкулеза специфическое свечение было обнаружено в 6 пробах, из которых сначала не удалось выделить бактерии псевдотуберкулеза. Позднее из 2 смывов (со стеллажа овощехранилища и с листьев капусты) было выделено 2 штамма Y. pseudotuberculosis.

МФА для диагностики псевдотуберкулеза у больных людей применяли также Г.Я. Ценева и соавт. Для этого они использовали высокочувствительные (0,1 млн микробных клеток в 1 мл чистой культуры) и специфичные (флюоресценция гетерологичных антигенов отсутствовала) флюоресцирующие конъюгаты. Как известно, значение МФА повышается при условии применения монорецепторных сывороток. Только в этом случае возможны одновременное выявление и типирование этиологического агента, что существенно повышает значение метода, особенно при расшифровке групповых заболеваний и установлении эпидемиологических связей. Используемые авторами моновалентные флюоресцирующие антитела, полученные к самому распространенному серологическому варианту (серовару 1), лучше всего отвечали этому назначению. Применяя одновременно РНГА и МФА с новыми иммунологическими препаратами (иммуноглобулиновый эритроцитарный диагностикум и флюоресцирующие антитела), авторы в 76,3 % случаев установили псевдотуберкулезную природу болезни в течение 1-й недели. Было показано, что сочетанное применение ускоренных методов обеспечивает постановку правильного диагноза значительно чаще, чем при использовании только бактериологического исследования или РНГА с антигенным диагностикумом.

Иммуноферментный анализ (ИФА), несмотря на отсутствие коммерческих тест-систем для него, считается в настоящее время одним из наиболее эффективных методов лабораторной диагностики псевдотуберкулеза. Он характеризуется высокой чувствительностью, возможностью количественного учета результатов и быстротой постановки реакции.

В.Н. Багрянцев и соавт. разработали метод ИФА для индикации антигенов возбудителя псевдотуберкулеза и антител к нему и показали, что ИФА значительно чувствительнее, чем применяемые в настоящее время агглютинационные и гемагтлю-тинационные тесты. Так, при исследовании 30 сывороток крови больных, подозрительных на псевдотуберкулез и взятых в различные сроки заболевания (3—17 дней), отмечено, что титры антител, выявляемые методом ИФА, в сравнении с PA и РНГА превышают последние в 10 раз. Особенно ценно то, что ИФА позволяет определить антиген возбудителя в крови в первые дни болезни. Эти авторы установили также, что антиген возбудителя псевдотуберкулеза циркулирует в крови с 4-го по 14-й день (срок наблюдения). Однако титры антигена в первые дни болезни выше (1 : 32—1 : 512), чем в поздние сроки болезни (1 : 8—1 : 32). Обнадеживающие результаты получены авторами при исследовании методом ИФА проб органов и фекалий грызунов на наличие антигена псевдотуберкулезного микроба. Так, при исследовании 20 проб органов и фекалий грызунов, обитающих в очагах псевдотуберкулеза, 11 были положительны с антигеном возбудителя псевдотуберкулеза 1, 3 и 4-го серовариантов. Антиген псевдотуберкулезного микроба сероварианта 1 выявлен в 6 пробах, 3—4-го серовариантов — в 5 пробах. В то же время при постановке РТНГА авторы не получили положительных результатов.

Выделение из внешней мембраны псевдотуберкулезного микроба видоспецифического полипептида, ассоциированного с пептидогликаном (порина), позволили О.Д. Новиковой и соавт. разработать для выявления антигенов псевдотуберкулезного микроба метод ИФА в двух модификациях — «сэндвич» и «метод двойных антител». Полученные автором результаты представляют несомненный интерес, так как они позволили впервые в нашей стране сделать вывод о существовании принципиальной возможности индикации бактерий псевдотуберкулеза всех серовариантов в окружающей среде с помощью ИФА на основе сыворотки к видоспецифическому белку-порину Y.pseudotuberculosis.

Л.Б. Куляшова использовала при конструировании новой системы для ИФА синтетические олигопротеиды, аналогичные поверхностным белковым структурам клеточной стенки, участвующим в начальных этапах развития псевдотуберкулезной инфекции. Олигопротеиды представляют собой видоспецифические фрагменты белка инвазина Y.pseudotuberculosis. Автор получила конъюгат олигопротеидов с бычьим сывороточным альбумином и тиреоглобулином свиньи. Антигенные компоненты были использованы для получения гипериммунных сывороток. Антисыворотка к одному из препаратов, выявляющая у всех исследованных штаммов одну антигенную полосу, была применена автором с технологической целью. Из нее были выделены иммуноглобулины для конструирования диагностической тест-системы. Полученная тест-система выявляла антигены псевдотуберкулезного микроба серовариантов 1—6 в бактериальных культурах и биологических субстратах и не вступала в реакцию с представителями вида Y. enterocolitiea и другими бактериями семейства Enterobacteriaceae.

Известно, какие трудности представляет диагностика острого аппендицита псевдотуберкулезной этиологии. В.Е. Назаров и Ю.Б. Буйневич, отмечая малую эффективность и информативность РНГА и бактериологического исследования, предложили использовать для выявления антигенов возбудителя псевдотуберкулеза и антител к ним сочетание ИФА, PKA и PA. На основании оценки частоты положительных ответов в зависимости от сроков взятия и вида материала авторы установили, что оптимальным является исследование кала и слюны при использовании ИФА и PKA до операции, что позволило им обнаружить псевдотуберкулезную инфекцию у 81,8 % обследованных больных с острым аппендицитом псевдотуберкулезной этиологии. Как полагают авторы, предлагаемая ими тактика лабораторной диагностики с использованием комбинации указанных методов позволяет выявить у больных псевдотуберкулезный процесс на ранних стадиях заболевания. Сравнительное изучение частоты выявления антигенов возбудителя псевдотуберкулеза в экскретах экспериментально инфицированных животных с помощью этой тест-системы показало ее высокую эффективность на ранней стадии развития инфекционного процесса (3-и сутки с момента заражения).

Для обнаружения Y.pseudotuberculosis С.А. Коровкин и соавт. разработали методику постановки точечного ИФА на нитроцеллюлозной пленке (дот-иммуноанализ). Авторы отмечали высокую чувствительность, простоту и экономичность данного метода, возможность его применения в лабораторных и полевых условиях.

Для выявления бактерий псевдотуберкулеза, несущих плазмиду вирулентности с мол.м. 40—50 md, S. Kaneko и Т. Маruуаmа с успехом использовали дот-иммуноанализ. Авторы отмечали, что этот метод может применяться для определения среди выделенных культур Y. pseudotuberculosis патогенных и непатогенных штаммов. Несомненным достоинством этого метода служит его видоспецифичность, т.е. возможность выявления Y. pseudotuberculosis всех серовариантов. Поскольку и «бесплазмидные» (вернее, не обладающие плазмидой с мол.м. 40—50 md) штаммы псевдотуберкулезного микроба могут вызвать развитие патологического процесса в чувствительном организме, то к существенным недостаткам данного метода можно отнести возможность выявления лишь бактерий псевдотуберкулеза, содержащих плазмиду с мол.м. 40—50 md, т.е. неполная видоспецифичность.

О.А. Бургасова и соавт. обнаруживали псевдотуберкулезный антиген в биологических субстратах при помощи твердофазного ИФА. Они установили, что частота выявления антигена во всех исследованных образцах копрофильтратов и мочи больных псевдотуберкулезом составляла 40—80 %. При этом чаще антигены возбудителя псевдотуберкулеза определялись в копрофильтрате, особенно у больных с выраженным диарейным синдромом. Отмечено, что число положительных проб при проведении ИФА на 1-й неделе болезни составляло 85 %, а при бактериологическом исследовании — 38 %. На 2-й неделе частота обнаружения антигена при ИФА заметно уменьшилась и к концу недели равнялась 37 %, а при бактериологическом исследовании — 10 %. На 3-й неделе положительные результаты при ИФА составили 9 %. Частота обнаружения антигенов в моче не превышала 18—40 % во все периоды болезни.

Аллергический метод. В течении псевдотуберкулезной инфекции как отечественные, так и зарубежные исследователи неоднократно отмечали значительную роль аллергического компонента в патогенезе болезни. Проведенные нами исследования показали, что иммунитет при псевдотуберкулезе является многокомпонентным: наряду с такими феноменами, как фагоцитоз и антителообразование, в иммуногенезе инфекции значительную роль играет повышенная чувствительность замедленного типа (ГЗТ). Возникновение ГЗТ связано прежде всего с инвазией возбудителя псевдотуберкулеза в клетки макроорганизма. Внутриклеточное паразитирование включает клеточно-опосредованный иммунитет с ГЗТ.

Для изучения закономерностей развития ГЗТ в клинической картине и диагностике псевдотуберкулеза было необходимо разработать и получить высокоспецифичный и ареактогенный препарат, который можно использовать для исследований в тестах in vivo и in vitro. Попытки получить аллерген для диагностики псевдотуберкулеза предпринимались различными исследователями. Необходимость иметь аллерген псевдотуберкулезного микроба как еще один дополнительный тест не вызывала сомнений, так как течение инфекции характеризуется большим полиморфизмом. Клинические симптомы заболевания нередко такие же, как при других инфекциях, вследствие чего дифференциальная диагностика осложняется, особенно при стертых клинических формах псевдотуберкулеза. Нами в исследованиях применялся аллерген, полученный М.Ф. Дзадзиевой и соавт. К сожалению, промышленность еще не выпускает этот препарат. Он представляет собой сложный комплекс белка (63—75 %), углеводов (8—9 %), легко экстрагируемых липидов (2,3-2,5 %), связанных липидов (0,2-0,3 %) и нуклеиновых кислот (9—11 %). Ho химическому составу он близок к аллергенам, полученным путем щелочного экстрагирования. Однако аллерген-псевдотуберкулин получен после отделения поверхностных токсичных субстанций возбудителя, способных вызвать неспецифические реакции. Препарат испытан на интактных добровольцах. У больных псевдотуберкулезом положительные кожные реакции отмечались уже со 2-й недели болезни (10—14-й день) и достигали максимума к 5—6-й неделе. Частота подтверждений диагноза при постановке кожной пробы в сравнении с результатами реакции агглютинации была приблизительно одинаковой.

При обследовании лиц, переболевших псевдотуберкулезом, спустя 2,5—4 мес установлено, что положительные внутрикожные пробы регистрируются в 100 и 80 % случаев соответственно. Таким образом, авторы показали, что псевдотуберкулин можно использовать для дифференциальной диагностики псевдотуберкулеза. Внутрикожный метод диагностики псевдотуберкулеза с псевдотуберкулином специфичен, чувствителен, информативен и доступен для применения как в крупных клиниках, так и в сельских больницах. При помощи аллергена-псевдотуберкулина возможна также аллергодиагностика in vitro. С этой целью используют реакции бласттрансформации и торможения миграции лейкоцитов, а также реакцию повреждаемости нейтрофилов.

Н.Ф. Тимченко и соавт. применили ряд тестов для диагностики псевдотуберкулеза и определения состояния клеточной реактивности больных псевдотуберкулезом. В динамике инфекционного процесса при псевдотуберкулезе авторы проследили корреляцию выраженности аллергической альтерации нейтрофилов, реакции торможения миграции лейкоцитов и сероконверсии. Обнаружена также весьма тесная связь между показателями внутрикожных проб, PA и РНГА. Во всех примененных тестах псевдотуберкулин оказался высокоспецифичным препаратом. Лейкоциты практически здоровых людей и больных с заболеваниями непсевдотуберкулезной этиологии не реагировали на его действие. Все клеточные реакции были особенно выражены в острый период болезни и снижались в период реконвалесценции. Авторы полагают, что слабая клеточная реакция у больных с рецидивирующим течением псевдотуберкулеза отражает сниженную общую реактивность организма и подавление иммуногенеза. Рецидивы обычно возникали на фоне слабой активности клеточных элементов иммунной системы. Низкие иммунологические показатели клеточного иммунитета при псевдотуберкулезе, таким образом, явились предвестниками рецидивов и возможных осложнений.

В настоящее время апробированы и в ближайшее время могут найти применение такие современные методы, как иммуноблоттинг, полимеразная цепная реакция (ПЦР). Эти методы значительно увеличивают вероятность правильного лабораторного диагноза уже при первом обследовании больного. Так, для постановки диагноза при помощи ПЦР достаточно нескольких молекул ДНК иерсиний псевдотуберкулеза в исследуемом материале. В последнее время предприятие «НИАРМЕДИК» при НИИ эпидемиологии и микробиологии им. Н.Ф. Гамалеи РАМН готовит и реализует ингредиенты для проведения ПЦР при псевдотуберкулезе. Однако использование в практике этого высокоэффективного метода ограничивается невозможностью приобретения дорогостоящей аппаратуры и реагентов для ПЦР.

Как видно из приведенного в настоящей главе обзора методов серологической диагностики псевдотуберкулеза, они достаточно специфичны, чувствительны и могут с успехом применяться в различных сочетаниях. Однако до тех пор, пока не будет налажен промышленный выпуск стандартных высокочувствительных и специфичных тест-систем, которые могли бы приобретать практические лаборатории, диагностика псевдотуберкулеза останется в основном уделом клиницистов. Клинический же диагноз, не подтвержденный лабораторными исследованиями, не всегда может быть точным, поскольку клиническая картина отдельных проявлений псевдотуберкулеза сходна с таковой при многих инфекционных болезнях.